Este proceso se divide en dos etapas:

• La iniciación: Desenrollamiento y apertura de la doble hélice. En el cromosoma bacteriano, la replicación se inicia en una región del ADN llamada oriC o punto de iniciación. Aquí abundan las secuencias de bases GATC. Se producen varios acontecimientos:

-El punto de iniciación es reconocido por unas proteínas específicas que se unen a él. Las enzimas helicasas rompen los enlaces de hidrógeno, utilizando ATP, y la doble hélice se abre.
-Se produce desenrollamiento en esa zona, se crean tensiones que provocan mayor enrollamiento. La acción de las enzimas girasas y las topoisomerasas evitan esas tensiones, rompiendo y soldando de nuevo la hélice de ADN.
-Las proteínas SSB se unen a las hebras molde, impiden que se vuelva a enrollar el ADN.
Se ha formado una burbuja de replicación alrededor del oriC en la que hay dos zonas llamadas horquillas de replicación, donde se sintetizan las nuevas hebras de ADN. La replicación es bidireccional.